Pureza por HPLC en péptidos
Cómo se mide la pureza de un péptido, paso a paso. Protocolo de fase reversa basado en directrices USP y adaptado a péptidos sintéticos.
Metodología HPLC
Cómo se mide la pureza de un péptido, paso a paso. Protocolo de fase reversa basado en directrices USP y adaptado a péptidos sintéticos.
- Preparación de muestra — Disolución en fase móvil con filtración a 0.22 μm para eliminar partículas que interfieran con la lectura cromatográfica.
- Separación cromatográfica — Columna C18 de fase reversa (250 × 4.6 mm, 5 μm). Gradiente acetonitrilo/agua con TFA 0.1 %. Flujo 1.0 mL/min.
- Detección UV a 220 nm — Longitud de onda optimizada para el enlace peptídico. Inyección de 20 μL con detector de arreglo de diodos (DAD).
- Cálculo de pureza — Normalización de área: % pureza = (área del pico principal / área total) × 100. Se reportan todas las impurezas > 0.1 %.
¿Qué mide la HPLC?
La HPLC separa los componentes de una muestra según su afinidad por las fases estacionaria y móvil. El área del pico principal frente al área total de picos determina el porcentaje de pureza del péptido: cuanto mayor es ese porcentaje, menor es la proporción de impurezas o fragmentos de síntesis.
Verificación cruzada con espectrometría de masas
La HPLC cuantifica la pureza; la espectrometría de masas (MS) confirma que la masa molecular medida corresponde a la del péptido esperado. Ambas técnicas juntas validan identidad y pureza, no solo una de las dos.
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Peptidos Club no realiza afirmaciones de eficacia ni de seguridad en humanos. La información de esta página resume literatura de investigación con fines de referencia técnica y no constituye consejo médico, indicación de uso ni sugerencia de dosificación. Todos los compuestos son reactivos de grado investigación (RUO) para uso exclusivo en laboratorio.